安徽医科大学学报
2013 03 v.48 232-235
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基金项目: 安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187);; 安徽省自然科学基金项目(编号:11040606M170);安徽省自然科学基金项目(编号:11040606M164)
作者：李新颖;潘林鑫;耿慧武;刘君;刘晓颖;范礼斌;
关键词：金属硫蛋白;;细胞定位;;转染;;免疫印迹
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.03.007
〔摘 要〕 目的用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人金属硫蛋白2A(MT2A)真核表达载体,用其转染HEK 293T,COS-7细胞观察MT2A在增殖细胞内的表达和定位。方法设计带FLAG-tag的引物,以人MT2A全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增MT2A全长序列,然后插入pCDNA 3.1中构建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;将构建的质粒转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;脂质体法转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察MT2A表达的蛋白在细胞内定位。结果正确构建了pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;其在HEK 293T细胞中能有效地表达;免疫荧光实验表明在COS-7细胞中,MT2A主要分布在细胞质内。结论该研究结果为了解MT2A在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础。