安徽医科大学学报
2013 01 v.48 89-93
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基金项目: 国家自然科学基金(编号:81072686)
作者:徐涛;黄成;李琳;张磊;吕雄文;李俊;
关键词:TRPM7;;COS-7;;基因表达
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.01.027
〔摘 要〕 从肝星状细胞(HSC-T6)中获得瞬时受体电位通道7(TRPM7)蛋白的cDNA,采用EcoR I和BamH I双酶切,用T4连接酶将该cDNA连接pEGFP-C2质粒将构建成功的pEGFP-C2-TRPM7质粒经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后转染非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,PCR鉴定基因表达。结果显示进行双酶切鉴定该质粒可见TRPM7片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果也可检测到TRPM7基因表达。表明成功构建重组pEGFP-C2-TRPM7表达裁体,TR-PM7蛋白可与绿色荧光蛋白在COS-7细胞中融合表达。