基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:1908085QH327);
作者:李心怡,李茜,张伟,李小静
关键词:病理性瘢痕;miR-148b-3p;富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白;增殖;
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.09.016
〔摘 要〕 目的 分析miR-148b-3p对瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞增殖的影响。方法 通过Real-time PCR分析人瘢痕疙瘩来源成纤维细胞(HKF)和正常人成纤维细胞(NFs)中miR-148b-3p和SPARC的表达水平。通过Western blot检测细胞中富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)蛋白表达水平。利用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和平板克隆形成分析miR-148b-3p和SPARC对HKF增殖的影响。使用在线分析软件预测miR-148b-3p的靶基因,随后构建荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶报告基因法分析miR-148b-3p与靶基因的靶向结合位点。结果 miR-148b-3p在HKF中低表达,SPARC在HKF中高表达。在HKF细胞中转染miR-148b-3p能够下调SPARC的表达,并抑制细胞增殖。在线分析软件预测miR-148b-3p能够靶向结合SPARC的3′-UTR;双荧光素酶报告基因的结果进一步证实miR-148b-3p能够靶向作用于SPARC的3′-UTR。在转染miR-148b-3p的HKF中再转染SPARC真核表达质粒,能够抵消miR-148b-3p的作用,恢复细胞增殖能力。结论 miR-148b-3p通过靶向作用于SPARC的3′-UTR,抑制其表达,抑制HKF增殖。