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免疫沉淀联合质谱筛选与纳尔逊湾正呼肠孤病毒σNS互作的宿主RNA结合蛋白

安徽医科大学学报     字体:

基金项目: 辽宁省自然科学基金(编号:2022-BS-320);

作者:李润林,胡思漫,骆丽可,贾雪娇,刘梦琦,李永刚,陶晓莉

关键词:纳尔逊湾病毒;σNS蛋白;RNA结合蛋白;宿主蛋白;免疫沉淀;

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.09.018

〔摘 要〕 目的 筛选出宿主细胞中与纳尔逊湾呼肠孤病毒(NBV)非结构蛋白σNS互作的RNA结合蛋白并分析其生物信息学功能。方法 本研究通过构建NBVσNS真核表达载体pEF-HA-MB-S3,验证正确后转染HEK293T细胞,所得的细胞蛋白裂解液经RNase A处理后,利用免疫沉淀富集σNS结合蛋白,经LC-MS/MS质谱分析技术鉴定分析互作蛋白,并且借助相关生信工具挖掘蛋白性质和具体功能。结果本实验成功筛选出32个与NBVσNS蛋白存在互作的候选RNA结合蛋白;生物分析结果显示,这些蛋白主要定位于细胞质与细胞核中,并且主要参与细胞代谢、生物调控、病毒翻译与转录等生物学过程。结论 本研究初步分析与NBVσNS互作的RNA结合蛋白功能,为深入研究σNS蛋白在NBV生命周期中的作用机制奠定基础。