安徽医科大学学报
2012 07 v.47 789-792
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基金项目: 安徽省教育厅自然科学基金(编号:KJ2008B283)
作者:徐生林;胡勇;金问森;王明明;王京;王娟;
关键词:PTEN;;分子克隆;;真核表达;;骨肉瘤;;载体
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2012.07.009
〔摘 要〕 目的构建PTEN基因真核表达载体,为PTEN基因功能研究提供工具。方法从人淋巴细胞中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应扩增PTEN基因编码区,将其克隆入pEGFP-N1载体中。通过聚合酶链反应、酶切和DNA测序鉴定所构建的载体。脂质体包裹重组载体转染骨肉瘤MG63细胞,RT-PCR和Western blot检测转染后的骨肉瘤MG63细胞中PTEN基因mRNA和蛋白质表达情况。结果经过限制性酶切和测序鉴定得到重组子GFP-PTEN大小符合,序列与GenBank中人DNA的PTEN基因(NM_000314)完全一致。转染GFP-PTEN基因的骨肉瘤MG63细胞中PTEN基因mRNA和蛋白高水平表达。结论成功地构建了PTEN基因真核表达载体。