安徽医科大学学报
2012 03 v.47 279-282
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基金项目: 安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187);; 安徽省自然科学基金项目(编号:11040606M170);安徽省自然科学基金项目(编号:11040606M164)
作者：刘君;耿慧武;陈应炉;刘晓颖;范礼斌;
关键词：基因表达;;转染;;COX6B1;;细胞定位
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2012.03.012
〔摘 要〕 目的构建带FLAG标签的人野生型细胞色素氧化酶亚基COX6B1表达载体,转染至HEK 293T、COS7细胞观察COX6B1蛋白在细胞内表达与定位。方法以含人COX6B1全长cDNA序列的质粒为模板,通过上游带有FLAG标签的引物,PCR方法扩增出COX6B1全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中构建pCDNA3.1-FLAG-COX6B1表达载体。将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。结果成功构建了pCD-NA3.1-FLAG-COX6B1表达载体,其在HEK 293T细胞中能有效地表达;在COS7细胞中呈斑点状分布,且主要在胞质内分布,细胞核中未见其明显表达。结论 COX6B1在HEK293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在胞质内,这为进一步了解COX6B1的功能提供了一定的基础。