安徽医科大学学报
2012 02 v.47 133-136
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基金项目: 安徽高校省级自然科学研究重点项目(编号:KJ2011A171);; 安徽省“115”产业创新团队—肝细胞癌转移复发研究团队资助项目
作者：董训忠;李建生;许戈良;荚卫东;陈浩;任维华;
关键词：细胞外基质蛋白-1;;肝癌细胞;;基因表达
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2012.02.007
〔摘 要〕 目的构建细胞外基质蛋白-1(ECM1)稳定表达的SMMC-7721肝癌细胞系。方法应用PCR和DNA重组技术构建pEGFP-N2-ECM1真核表达载体,经酶切、测序鉴定正确后,用脂质体转染SMMC-7721细胞,G418药物筛选稳定转染的细胞系。荧光显微镜检测融合蛋白表达,RT-PCR技术检测ECM1基因表达。结果构建的重组质粒经双酶切及测序分析鉴定,结果证实pEGFP-N2-ECM1构建成功;筛选获得稳定表达ECM1的SMMC-7721细胞。结论成功构建了pEGFP-N2-ECM1的真核表达载体,并在肝癌SMMC-7721细胞中稳定表达,为研究ECM1在肝癌进展中的作用奠定了实验基础。