安徽医科大学学报
2012 02 v.47 109-112
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基金项目: 国家自然科学基金(编号:30872209);; 安徽省高等学校省级自然科学研究项目(编号:KJ2008B282);; 安徽医科大学博士科研资助项目(编号:XJ200708);; 教育部博士点基金(编号:200803660003)
作者：周超群;储德勇;姚涌;汪学龙;
关键词：基因表达;;小鼠sIL-13Rα2基因;;原核表达载体
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2012.02.001
〔摘 要〕 目的克隆并在原核表达载体pET-28a中表达小鼠IL-13受体α2(sIL-13Rα2)胞外区基因。方法利用小鼠3T3细胞总RNA,逆转录为cDNA,设计引物,常规PCR法扩增出小鼠sIL-13Rα2基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,经双酶切及测序鉴定后,再亚克隆入pET-28a,构建重组质粒pET-28a/sIL-13Rα2,并转化到大肠杆菌BL21感受态细胞。IPTG诱导表达后表达产物经Western blot鉴定。结果PCR扩增产物与预期大小相符合,重组质粒经双酶切鉴定及基因序列测定表明构建正确;sIL-13Rα2蛋白表达以包涵体形式存在,可与山羊抗小鼠sIL-13Rα2单克隆抗体发生特异性反应,相对分子质量约为36 ku。结论成功原核表达sIL-13Rα2基因,为进一步探讨sIL-13Rα2在血吸虫病肝纤维化过程中的调节作用奠定了基础。