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GATA2分子RNAi慢病毒颗粒的包装制备及表达研究

安徽医科大学学报 2011 09 v.46 843-846     字体:

基金项目: 国家自然科学基金面上项目(编号:81070392)

作者:蒋易楠;李长燕;詹轶群;杨晓明;汪思应;

关键词:GATA2转录因子;;RNA干扰;;慢病毒属;;遗传载体

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.09.001

〔摘 要〕 目的制备GATA2分子慢病毒干涉颗粒,建立GA-TA2表达下调的K562稳定细胞系。方法采用第3代慢病毒包装系统,将携带特异性干涉GATA2的DNA序列克隆入穿梭质粒PsicoR中,转染K562细胞,Western blot法检测对内源性GATA2干涉效果。在脂质体介导下,siGATA2质粒同包装质粒plP1、plP2、pl/VSVG共同转染HEK 293T细胞,获得慢病毒干涉颗粒,感染K562细胞,检测干涉效果。结果构建的重组质粒经酶切,测序鉴定结果正确,并有干涉效果。该重组质粒与包装质粒共同转染HEK293T细胞,获得干涉慢病毒并利用该病毒建立稳定表达的siGATA2-K562细胞系,经Western blot鉴定,稳定细胞系的内源性GATA2表达下调。结论成功制备siGATA2干涉病毒颗粒并构建si-GATA2-K562稳定细胞系,为后续实验奠定基础。