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牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的慢病毒载体的构建及鉴定

安徽医科大学学报 2011 07 v.46 709-712     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:30872992)

作者:张晓宇;秦宜德;张文晓;郑欣;何晓光;王巍;

关键词:乳铁蛋白;;细胞凋亡

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.07.028

〔摘 要〕 目的构建并鉴定牛乳铁蛋白肽基因LfcinB基因的慢病毒载体,为LfcinB应用于基因治疗奠定了基础,以便进一步研究LfcinB的功能。方法根据GenBank报道的Lf-cinB基因序列,合成LfcinB基因,PCR方法扩增LfcinB基因,与经EcoR 1和Nhe 1酶切后的pljm1载体[含CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接、转化,产生pljm1-LfcinB慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pljm1-Lf-cinB载体、△8.91载体、pvsvg载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞中绿色荧光蛋白GFP的表达水平测定病毒滴度。Western blot检测Lf-cinB的表达。结果 PCR和测序证实成功构建了pljm1-Lf-cinB慢病毒载体。浓缩病毒悬液滴度为2×108 TU/ML。Western blot检测到目的肽成功表达。结论成功构建含LfcinB的慢病毒载体,为进一步感染细胞和基因治疗奠定了基础。