基金项目: 国家自然科学基金(编号:30972791)
作者:沈磊;胡梅琮;吴亚欧;张梅;李群;桂丽;胡春松;张林杰;黄保军;
关键词:胃肿瘤;;细胞凋亡;;质粒;;重组融合蛋白质类
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.06.006
〔摘 要〕 目的构建pDsRED2-HMGB1重组质粒,探讨转染高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对奥沙利铂诱导的SGC-7901细胞凋亡的影响。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HMGB1 mRNA全编码序列,将PCR产物插入到pD-sRED2-N1载体的Xho I和EcoR I位点,构建pDsRED2-HMGB1重组质粒;通过脂质体法转染SGC-7901胃癌细胞,荧光显微镜检测HMGB1红色荧光融合蛋白表达。Westernblot鉴定HMGB1蛋白表达。应用流式细胞仪(Annexin-V/PI标记)分析HMGB1过表达对奥沙利铂诱导胃癌细胞凋亡的影响。结果成功构建真核表达质粒pDsRED2-HMGB1,转染SGC-7901细胞后,荧光显微镜下可见细胞内有HMGB1红色荧光融合蛋白的表达;流式细胞术检测发现转染pD-sRED2-HMGB1后SGC-7901细胞凋亡水平较转染pDsRED2-N1组下降22.4%。结论 HMGB1过表达可抑制奥沙利铂诱导的SGC-7901胃癌细胞凋亡。