安徽医科大学学报
2011 05 v.46 493-496
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基金项目: 国家自然科学基金(编号:81001168,81072127);; 安徽省自然科学基金(编号:090413117);; 安徽省高等学校省级自然科学研究项目(编号:KJ2010B375)
作者：朱靖;周颖;王青元;冯定庆;朱园园;李彩荣;凌斌;
关键词：遗传载体;;原核细胞;;重组融合蛋白质类
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.05.031
〔摘 要〕 目的构建GRIM-19原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化GST-GRIM-19融合蛋白。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19基因片段,将其克隆至pGEX-4T-3原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19融合蛋白,用Glu-tathione Sepharose 4B纯化,纯化后蛋白经Western blot鉴定。结果构建pGEX-4T-3-GRIM-19原核表达载体成功,表达的GST-GRIM-19融合蛋白相对分子质量约45 ku,浓度0.1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导2 h,并成功纯化到融合蛋白。结论成功构建GRIM-19原核表达载体,诱导表达并纯化GST-GRIM-19融合蛋白。