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pmCherry-N1-WWOX真核表达载体的构建及其在胆管癌细胞QBC939中的表达

安徽医科大学学报 2011 04 v.46 328-332     字体:

基金项目:

作者:朱凯;黄强;

关键词:基因,肿瘤抑癌;;基因表达;;胆管肿瘤

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.04.007

〔摘 要〕 目的构建人脆性位点抑癌基因WWOX真核表达载体,并观察其在人胆管癌细胞株QBC939中的表达。方法通过全基因合成的WWOX cDNA为模版,用PCR技术扩增,将扩增片段连接到PUC57质粒,构建克隆载体,鉴定出阳性克隆后用DNA测序法鉴定重组质粒。将克隆载体与pm-Cherry-N1同时用Xho I/BamH I双酶切,构建真核表达载体pmCherry-N1-WWOX,以重组质粒转染QBC939细胞,通过Western blot检测转染细胞中WWOX的表达。结果成功扩增WWOX基因片段,重组质粒的酶切鉴定及测序结果均证明WWOX基因成功克隆到真核表达载体中,Western blot结果证实转染重组质粒后的QBC939细胞WWOX蛋白表达增强。结论成功构建出含人WWOX基因的真核表达质粒,并将重组质粒pmCherry-N1-WWOX转染到QBC939细胞,为研究WWOX基因在肿瘤发生、发展中的作用提供了有效的分子工具。