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日本血吸虫P14钙结合蛋白样蛋白基因真核表达载体的构建、表达和鉴定

安徽医科大学学报 2011 04 v.46 321-324     字体:

基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:3080069);; 安徽省自然科学基金资助项目(编号:kj2008B328)

作者:汪礼文;唐小牛;姚湧;汪学龙;

关键词:血吸虫,日本;;基因表达

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.04.005

〔摘 要〕 目的从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出钙结合蛋白样蛋白SjP14编码基因,并亚克隆至真核表达载体pcD-NA3.1(+),制备重组分子疫苗。方法提取日本血吸虫成虫总RNA,逆转录cDNA,设计引物常规PCR法扩增出SjP14编码基因,通过线性T克隆载体pGEM-T连接,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),经转染至Hela细胞中表达,表达产物经Western blot鉴定。结果 PCR扩增产物与预期大小相一致,pGEM-T-SjP14及pcDNA3.1(+)-SjP14分别经双酶切后均获得一特异性基因片段,表达产物经Western blot鉴定分子量约为38ku。结论成功构建了日本血吸虫钙结合蛋白样蛋白真核表达载体,并获得了表达产物。