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小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体的构建

安徽医科大学学报 2023 07 v.58 1082-1086     字体:

基金项目: 安徽省自然科学基金资助项目(编号:2108085MH320);;安徽省高校协同创新项目(编号:GXXT-2020-065)

作者:许媛;魏伟;常艳;

关键词:TDO2;;基因敲除;;CRISPR/Cas9;;打靶载体

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.07.004

〔摘 要〕 目的 构建小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体,为建立TDO2基因条件性敲除小鼠奠定基础。方法 根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor载体,以TDO2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子3作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除TDO2第3号外显子的条件性基因打靶载体。将CRISPR/Cas9复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,获得阳性F0小鼠,再将阳性F0代小鼠与C57BL/6小鼠交配获得F1代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1代小鼠基因型。结果 结果证实所构建的TDO2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-TDO2~(em1C)flox/Gpt小鼠。结论 成功构建了小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建TDO2基因条件敲除小鼠奠定了基础。