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Panton-Valentine杀白细胞素原核表达、纯化及生物学活性鉴定

安徽医科大学学报 2011 01 v.46 6-10     字体:

基金项目: 安徽省2007年度科技攻关计划(编号:07010302192)

作者:常文娇;马筱玲;沈继龙;高朋;戴媛媛;张翠萍;周馨;周文静;

关键词:杀白细胞素类/遗传学;;基因表达;;细胞凋亡;;葡萄球菌,金黄色

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2011.01.003

〔摘 要〕 目的原核表达金黄色葡萄球菌Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)蛋白,并进行生物学活性鉴定。方法提取PVL阳性金黄色葡萄球菌DNA,利用PCR扩增LukF-PV和LukS-PV编码基因,亚克隆入表达载体pET28 a,转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21株,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后获得可溶性的蛋白,Western blot对其鉴定。并以人多形核粒细胞(PMNs)为靶细胞检测其生物学活性。结果成功构建了LukF-PV和LukS-PV基因的表达载体,经IPTG诱导和亲和层析纯化法获得重组蛋白,Western blot鉴定证实其为重组PVL蛋白。实验表明该蛋白具有诱导人多形核粒细胞(PMNs)凋亡的作用。结论成功地表达获得了具有生物学活性的PVL重组蛋白,为PVL快速检测方法的建立和致病机制研究奠定基础。