安徽医科大学学报
2010 06 v.45 737-739
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基金项目: 安徽省自然科学基金重点项目(编号:KJ2008A085);; 安徽省科技攻关项目(编号:08010302179)
作者:王兴满;吴琼;汤仁树;甘霖;赵俊;王明丽;
关键词:原核细胞;;免疫血清
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2010.06.003
〔摘 要〕 目的采用原核表达系统获得HCMV pp65目的蛋白,免疫家兔制备该蛋白特异性抗血清。方法构建表达GST-HCMV pp65融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达,经GST亲和层析纯化后的pp65蛋白免疫家兔,获得兔多克隆抗血清。采用ELISA、SDS-PAGE电泳及Western blot检测纯化后的蛋白,并以间接免疫荧光染色法检测鉴定该蛋白的抗原性。结果成功构建PGEX-5X-pp65重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得可溶性的融合蛋白;GST亲和层析纯化后的蛋白免疫家兔获得特异性抗血清。结论在原核细胞中成功获得了融合蛋白pp65,免疫家兔后获得具有高度特异性抗血清。为进一步揭示该蛋白的功能及作用机制奠定了重要基础。