安徽医科大学学报
2010 05 v.45 605-609
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基金项目: 北京市自然基金重点项目(编号:07G0802);; 国家自然科学基金重点项目(编号:30630035),国家自然科学基金面上项目(编号:30870958)
作者:黄先红;李长燕;詹轶群;王治东;许望翔;杨晓明;汪思应;
关键词:质粒;;遗传载体
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2010.05.004
〔摘 要〕 目的构建人死亡相关蛋白11(THAP11)基因的慢病毒载体,并建立其慢病毒表达系统。方法 PCR方法获得人THAP11基因,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒pBPLV-THAP11-myc,并通过转染HEK293细胞观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达以及Westernblot检测其表达。在脂质体介导下将重组质粒与包装质粒pLP1和pLP2、包膜质粒pLP/VSVG共转染293FT细胞包装产生慢病毒。结果构建的质粒经PCR,酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293FT细胞获取的5.5×106TU/ml慢病毒滴度。结论成功构建了人THAP11基因慢病毒载体质粒THAP11-myc-pBPLV,并建立了其慢病毒表达系统,为后续的应用研究奠定了基础。