〔摘　要〕 目的构建人视黄醇结合蛋白4(RBP4)cDNA全长的原核表达质粒(pET-28a(+)-hRBP4)并在大肠杆菌中高效表达。方法取成人正常肝脏组织提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收,构建克隆载体pMD-RBP4,设计带酶切位点BamHⅠ和HindⅢ的引物,PCR后酶切插入pET-28a(+)中,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,Western blot检测其特异表达,并对rhRBP4诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化;用镍亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定其纯度。结果测序证实所得的hRBP4 cDNA序列与其在GenBank中的序列基本一致,重组质粒pET-28a(+)-RBP4的双酶切结果与预期大小完全一致,IPTG诱导后高效表达的蛋白质以不溶性包涵体形式存在;Western blot结果证实表达产物为RBP4。IPTG诱导的最佳浓度是0.04mmol/L,时间为6h,温度为37℃,镍亲和层析后经电泳证实其纯度可达96%。结论经诱导表达和纯化的rhRBP4可用于制备抗体和进一步研究。