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人工miRNA簇表达载体的构建及检测

安徽医科大学学报 2010 03 v.45 294-297     字体:

基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:30873008)

作者:李纪鹏;付汉江;秦宜德;郑晓飞;

关键词:微RNAs;;遗传载体;;基因表达

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2010.03.003

〔摘 要〕 目的构建人工miRNA表达簇,并研究miRNA的加工对蛋白质表达水平的影响。方法从miRNA表达库中扩增miR-34a及miR-424的前体序列,将上述两种miRNA串联,构建PGL-34a-424人工miRNA簇表达载体。通过RT-PCR的方法检测人工miRNA簇的表达情况。然后将miRNA前体突变,再用荧光素酶报告基因技术研究miRNA的加工对蛋白质表达的影响。结果成功构建人工miRNA簇表达载体,荧光素酶实验显示miRNA的加工能够抑制蛋白的表达。结论人工miRNA表达簇能够高效表达,miRNA的加工对蛋白质的表达有抑制作用。