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pEGFP-N1-PP1α真核表达载体的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达

安徽医科大学学报 2010 01 v.45 17-20     字体:

基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:30772201)

作者:崔笑;尹宗生;

关键词:骨肉瘤;;基因表达;;蛋白磷酸酶Ⅰ;;遗传载体

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2010.01.005

〔摘 要〕 目的构建人PP1α基因真核表达载体,并观察其在人骨肉瘤细胞株(U-2OS)中的表达,为进一步研究PP1对骨肉瘤细胞凋亡影响提供基础。方法提取U-2OS细胞中总RNA,RT-PCR扩增PP1α并克隆至pEGFP-N1载体,鉴定出阳性克隆送测序,以重组质粒转染U-2OS细胞,通过West-ernblot检测转染细胞中PP1α的表达。结果成功扩增PP1α基因大小片段,重组质粒pEGFP-N1-PP1α的酶切鉴定及测序结果均证明PP1α基因成功克隆到真核表达载体中,Westernblot结果证实转染重组质粒后的U-2OS细胞PP1α蛋白表达水平增强。结论实验将pEGFP-N1-PP1α质粒转染到U-2OS细胞,可以在U-2OS细胞中获得PP1α蛋白增强表达。