安徽医科大学学报
2010 01 v.45 5-8
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基金项目: 安徽省高校青年教师科研资助计划(编号:2007jq1079);; 安徽医科大学博士科研基金(编号:XJ2005004)1
作者：武标;刘晓颖;范礼斌;邢昕;朱恒锐;汪云飞;
关键词：基因表达;;转染;;印迹法,蛋白质
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2010.01.002
〔摘 要〕 目的构建带FLAG标签的人类野生phb2(prohib-itin2)表达载体,将其转染至HEK293T细胞检测其表达,转染至COS7细胞观察phb2蛋白在细胞内的定位。方法以含有人phb2全长cDNA序列的质粒为模板,通过带有FLAG标签上游引物,用PCR方法扩增phb2全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3中构建pCDNA3-FLAG-phb2表达载体,将构建的质粒转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。结果成功构建了pCDNA3-FLAG-phb2表达载体,转染表明此表达载体在HEK293T细胞中能够有效表达,在COS7细胞中phb2呈斑点状主要在胞质内分布,细胞核中未见到明显的表达。结论实验结果为进一步了解phb2的功能提供了一定的基础。