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抗钩虫特异性卵黄抗体的制备与鉴定

安徽医科大学学报 2009 04 v.44 415-418     字体:

基金项目:

作者:王圆圆;廖法学;姚景辉;汪学龙;

关键词:钩虫病/免疫学

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2009.04.002

〔摘 要〕 目的制备并鉴定特异性抗十二指肠钩虫鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定基础。方法制备十二指肠钩虫成虫粗抗原,经皮下和肌肉注射免疫25周产蛋海兰母鸡3次,每只鸡每次的免疫剂量为200μg,初次免疫后28d进行加强免疫,加强免疫间隔时间为10d。水稀释法提取卵黄中的IgY,盐析、透析法纯化IgY,BCA法测定蛋白含量,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析。ELISA法动态检测抗体效价,观察抗体效价变化。结果免疫后55d的每个鸡蛋能提取40~55mg IgY,经SDS-PAGE和Western blot分析,纯化的IgY有2条主带,分子量分别是35ku和60ku,即IgY的轻链和重链。初次免疫后10d左右出现抗体,至免疫后50~55d为高峰,效价达到1∶10000以上。IgY与人血清抗体均可识别30ku处钩虫抗原。结论十二指肠钩虫成虫粗抗原免疫的海兰母鸡能产生高浓度、高效价、特异性的IgY抗体,为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定了基础。