安徽医科大学学报
2009 02 v.44 208-212
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基金项目: 安徽医科大学博士科研基金(编号:XJ200801)
作者:周海胜;汪渊;秦宜德;储斌;张胜权;周青;沈继龙;
关键词:质粒;;DNA
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2009.02.017
〔摘 要〕 目的利用一种快速、简便的方法提取动物细胞附加体DNA。方法通过电转移的方法介导pEGFP-N1转染小鼠成纤维细胞NIH3T3和中国仓鼠卵巢癌细胞CHO等细胞系。转染后48h,收集转染细胞。用STET缓冲液重悬细胞,加入碱裂解液裂解细胞,再用7.5mol/L醋酸胺中和。离心收集上清,用1∶1酚/氯仿抽提2次,氯仿抽提1次,乙醇沉淀附加体DNA。TE溶解DNA。提取的DNA通过PCR和Southern blot方法进行分析。结果PCR和Southern blot结果证实利用改良的碱裂解法可以从动物细胞提取附加体DNA。结论利用简便快速的碱裂解法可以提取哺乳动物细胞附加体DNA。