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乳源抗菌-免疫调节融合蛋白原核表达和纯化

安徽医科大学学报 2008 03 260-263     字体:

基金项目: 安徽省教育厅自然科学基金项目(编号:2005JK257)

作者:江良梁;秦宜德;周艳;王超;刘滋康;

关键词:大肠杆菌;;肽类/遗传学;;基因表达;;重组融合蛋白质类

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2008.03.006

〔摘 要〕 目的构建乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与免疫调节肽(PGPIPN)融合肽表达质粒,并在大肠杆菌BL21中表达及纯化。方法采用重叠延伸PCR技术获得融合肽基因片段,并构建到原核表达载体pGEX-KG中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21,然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。用Glutathione Sepharose4B亲和层析方法纯化融合蛋白。结果成功构建原核表达质粒pGEX-KG-FP,并在大肠杆菌BL21中诱导其高表达。SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异性的抗GST单克隆抗体所识别的融合蛋白分子量与理论值相近。经Glutathione Sepharose4B纯化后,得到较纯的GST-FP融合蛋白。结论构建了原核表达的融合蛋白质粒,并高效表达和纯化了该融合蛋白。