安徽医科大学学报
2007 06 638-641
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基金项目: 安徽医科大学博士科研基金(编号:XJ2005004)
作者:张庆慧;汪云飞;朱恒锐;刘晓颖;范礼斌;
关键词:基因表达;;转染;;印迹法,蛋白质
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2007.06.012
〔摘 要〕 目的构建带GFP标签的PAM14表达载体,将其转染至HEK293T细胞检测其表达,转染至COS7细胞观察PAM14蛋白在细胞内的定位。方法以含人PAM14全长cDNA序列的质粒pACT2-PAM14为模板,用PCR方法扩增PAM14全长序列,然后插入带GFP标签的载体pCDGFP中构建表达载体pCDGFP-PAM14,将构建的质粒转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western-blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。结果成功构建了表达载体pCDGFP-PAM14,此表达载体在HEK 293T细胞中能够有效表达,转染表明PAM14在COS7细胞主要在核内表达,胞质内也有少量表达。结论实验结果为进一步了解PAM14的功能提供了一定的基础。