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转人B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测

安徽医科大学学报 2007 03 279-282     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:30672335)

作者:邹多宏;郝艳红;周健;杨宏宇;何家才;王元银;阎旭;李宝金;唐爱发;

关键词:B淋巴细胞/免疫学;;癌,鳞状细胞;;细胞系

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2007.03.014

〔摘 要〕 目的探讨转入B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测。方法采用脂质体介导法将已建好的真核表达质粒pEGFP-C1-B7-H3导入人鳞癌细胞Tca8113中(Tca8113/B7-H3),RT-PCR检测B7-H3在该细胞中的表达,Western blot检测其蛋白的表达。经G418筛选后,用有限稀释法建立稳定高表达的带有B7-H3基因的Tca8113鳞癌细胞株。结果RT-PCR方法检测到目的基因B7-H3的一个215bp大小的cDNA扩增产物;DAB显色,裂解的Tca8113/B7-H3基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约65~86ku大小的特异性条带。转染B7-H3的Tca8113细胞,经过细胞传代培养后仍然能够检测到高表达的B7-H3基因,经过有限稀释法建立了Tca8113/B7-H3细胞株。结论成功建立了Tca8113/B7-H3细胞株,为以后的体内外试验提供了很好的平台,为近一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。