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重组质粒pSecTag2/B-OPG在Beagle犬骨髓基质细胞中表达与鉴定

安徽医科大学学报 2007 02 140-143     字体:

基金项目: 国家自然科学基金项目(编号:C03031101);; 安徽省教育厅自然科学基金项目(编号:2004kj219);; 安徽医科大学校科研基金项目(编号:2003zr01)

作者:操小马;赵春晖;梅陵宣;

关键词:成骨细胞;;骨髓细胞;;克隆,分子;;基因表达;;牙周疾病/治疗

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2007.02.006

〔摘 要〕 目的转染骨保护素(OPG)基因至Beagle犬骨髓基质细胞(BMSCs)中,并检测其表达能力,为基因工程技术治疗牙周病提供物质基础。方法穿刺抽取成年Beagle犬骨髓2~3ml,通过全骨髓贴壁法获取BMSCs。传代至第3代,脂质体瞬时转染经鉴定的重组pSecTag2/B-OPG,并用RT-PCR、Western blot检测OPG的表达水平。结果重组质粒pSecTag2/B-OPG经HindⅢ单酶切及EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,电泳显示切下的片段均与预期大小相符,经测序证实此基因与GenBank中提供的序列[gi33873056]一致;RT-PCR、Western blot结果显示重组pSecTag2/B-OPG在骨髓基质细胞中有表达。结论成功建立了OPG基因修饰的骨髓基质细胞瞬时基因表达体系。