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人胰高血糖素样肽-1突变体基因的构建和表达

安徽医科大学学报 2006 06 632-635     字体:

基金项目: 安徽省科技厅攻关项目(编号:06023064);; 安徽医科大学校级基金(2005Kj58);; 2006年度第一附属医院博士经费资助项目

作者:刘莉;胡红琳;丁振兴;王佑民;

关键词:胰高血糖素/遗传学;;基因表达

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2006.06.009

〔摘 要〕 目的构建人胰高血糖素样肽-1突变体(2Gly-hGLP-1)基因,并表达GST-2Gly-hGLP-1。方法用限制性内切酶双酶切载有hGLPcDNA的重组克隆质粒PMD18Tsimple和原核表达质粒pGEX-4T-1,将GLP-1定向插入原核表达载体pGEX-4T-1+中,筛选出阳性克隆。在获得重组hGLP-1基因工程菌的基础上,利用定向突变的技术改造其第2位丙氨酸为甘氨酸,经酶切克隆于pGEX-4T-1+中,构建pGEX-4T-1+/2Gly-hGLP-1表达载体。转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达。结果经测序分析,证明2Gly-hGLP-1已经克隆到pGEX-4T-1+中。Westernblot证实,该蛋白可被特异性hGLP-1识别。结论成功构建和表达了人胰高血糖素样肽-1突变体原核表达质粒。