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人脂联素基因真核表达载体的构建及表达

安徽医科大学学报 2006 05 525-527     字体:

基金项目: 安徽省自然科学基金项目(编号:03043719);; 安徽省教育厅自然科学研究项目(编号:2006KJ089A)

作者:丁振兴;王佑民;刘莉;

关键词:真核细胞;;DNA,重组;;脂肪组织/代谢

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2006.05.014

〔摘 要〕 目的克隆人脂联素(hAPM)基因及构建真核表达重组体PGEX-4T-1/hAPMcDNA,诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶-hAPM(GST-hAPM)融合蛋白。方法应用RT-PCR法从中国汉族人大网膜脂肪垫总RNA中扩增出APMcDNA全长基因,并在基因上下游分别克隆上EcoR1、Sal1两个酶切位点,将其定向导入PGEX-4T-1多克隆位点,构建PGEX-4T-1/hAPM融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达。结果从脂肪组织总RNA中扩增得到760bp片段APM基因,经双酶切鉴定及测序分析,证明hAPMcD-NA已克隆到PGEX-4T-1载体中。免疫印迹证实,诱导表达的融合蛋白可被多克隆抗体Acrp30(N-20)-R识别。结论成功诱导表达出融合蛋白GST-hAPM,为进一步获得大量可供实验研究和临床应用的重组hAPM创造条件。