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作者:陈跃;许戈良;王保龙;
关键词:小鼠;;T淋巴细胞亚型;;抗原;;流式细胞术
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2006.04.011
〔摘 要〕 目的体外诱导扩增抗原特异性CD4+CD25+T细胞,测定其免疫抑制功能,验证其抗原特异性。方法应用免疫磁珠法(MACS)分选C57BL/6鼠CD4+CD25+T细胞。CD4+CD25+T细胞在Balb/c鼠抗原刺激条件下,体外扩增获得Balb/c鼠抗原特异性的CD4+CD25+T细胞(iCD4+CD25+T),流式细胞术测定其纯度,RT-PCR方法测定其FoxP3mRNA。测定在Balb/c小鼠(A组)或昆明鼠(B组)抗原刺激条件下,iCD4+CD25+T抑制T细胞增殖的效率,验证iCD4+CD25+T的抗原特异性。ELISA法测定A、B组上清液中IL-10和TGF-β的含量。结果MACS分离的C57BL/6小鼠CD4+CD25+T细胞纯度为99.6%。扩增3周,iCD4+CD25+T纯度达85%,扩增数目达900倍,高表达Foxp3基因。当iCD4+CD25+T∶CD4+CD25-T为1∶1、1∶2时,A组抑制率明显高于B组(82.2%±3.29%vs11.6%±1.2%,54.4%±3.5%vs5.4%±1.7%,P<0.01)。A组IL-10和TGF-β的分泌量均高于B组(P<0.01)。结论在体外成功诱导扩增了具有免疫抑制功能的抗原特异性的CD4+CD25+调节性T细胞。