基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:30371320);; 安徽省自然科学基金资助项目(编号:03043601);; 安徽省教育厅自然科学基金资助项目(编号:2003kj182);; 安徽医科大学校科研基金资助项目(编号:200101)
作者:李栋梁;宋蔚;汪红俊;李群;黄保军;胡春松;罗畅民;何金生;
关键词:呼吸道合胞体病毒;;人/遗传学
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2006.02.001
〔摘 要〕 目的克隆A亚型人呼吸道合胞病毒(HRSV)G基因,构建G基因的真核表达载体,并进行表达和鉴定。方法自行设计引物,利用RTPCR技术,从感染HRSV的HEp2细胞中获得G基因片段,克隆到pGEMTeasy载体,经核酸序列分析,进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),酶切鉴定后,脂质体法转染COS7细胞,RTPCR和Westernblotting鉴定基因转录和蛋白表达。结果真核表达载体pcDNA3.1(+)G的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变。转染COS7细胞后,RTPCR检测到G基因有转录,Westernblotting分析观察到G蛋白特异性的表达条带。结论成功克隆A亚型HRSVG基因,并在真核细胞中获得表达。