基金项目: 国家 863计划生物现代农业技术领域资助项目 (编号:2003AA215071)
作者:王海萍,赵丽,王健伟,贾友苏,韩金祥,洪涛
关键词:抗原,CD4;;抗原,CD8;;逆转录聚合酶链反应
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2005.01.001
〔摘 要〕 目的 克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务。方法 从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX CS对其进行表达,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Westernblot对重组蛋白进行鉴定。结果 以小鼠脾细胞总RNA为模板,分别扩增出小鼠CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,将其插入表达载体pGEX CS,得到重组质粒pGEX CSCD4、pGEX CSCD8α和pGEX CSCD8β。将所获表达载体转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达,SDS PAGE检测表明小鼠CD4、CD8α、CD8β片段均得到成功表达,其表达量可占菌体蛋白总量的 30%左右,且均可与抗GST抗体反应。结论 成功克隆、表达了小鼠CD4、CD8α和CD8β,为进一步制备抗体从而用于免疫学研究打下了基础。