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蚀斑法定量测定HSV-2病毒颗粒的优化实验条件

安徽医科大学学报 2005 04 321-323     字体:

基金项目: 教育部科学技术研究重点项目(编号:01052);; 安徽省生物医药重大科技专项项目(编号:01303003)

作者:金晶,类延花,吴建军,王明丽

关键词:疱疹病毒2型,人;;滴定分析法

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2005.04.011

〔摘 要〕 目的建立稳定易操作的HSV-2蚀斑技术,为纯化和定量测定HSV-2毒株的感染性研究提供依据。方法HSV-2病毒悬液接种至Hela细胞单层,分别经37℃吸附和室温吸附60min,用含0·75%琼脂糖或0·75%羧甲基纤维素RPMI1640液覆盖,3d后用1%结晶紫染色5min,记数蚀斑数量,在挑取蚀斑接种扩增及保藏的同时,应用PCR法对蚀斑培养物进行鉴定。结果蚀斑经1%结晶紫染色在Hela细胞单层上呈紫色,多为圆形,着色深,散在分布,与周围区域界限明显。用琼脂糖和羧甲基纤维素覆盖下所形成的蚀斑大小及形状不同,但病毒滴度差异无显著性(P>0·05)。经室温和37℃吸附的病毒滴度差异亦无显著性(P>0·05)。结论建立了简便易行的蚀斑形成测定方法,可准确滴定HSV-2病毒感染数量和感染力。