安徽医科大学学报
2005 06
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基金项目: 安徽省高等学校青年教师科研基金资助(编号2004jq156)
作者:刘淼,杨致邦,沈际佳,汪学龙,江宝玲
关键词:基因;;克隆,分子;;空泡;;螺杆菌,幽门/遗传学
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2005.06.002
〔摘 要〕 目的采用基因工程技术获得具有良好免疫反应性的重组细胞空泡毒素的毒性亚单位蛋白。方法利用PCR技术从Hp基因组中扩增VacA基因毒性片段,插入原核表达载体pQE30上,测序后,转化表达宿主菌DH5α,SDSPAGE分析表达情况,Westernblot检测其免疫反应性。NiNTA2+树脂纯化后,用重组蛋白免疫兔,HelicoBlot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性。结果测序表明目的序列完整,与Genbank中的多株中国菌株相比有高度的同源性。SDSPAGE显示表达产物相对分子量为27000,表达量为30%以上。该蛋白可被Hp全菌抗血清所识别,纯化后可得到纯度为93%以上蛋白质,并证实有良好的免疫原性。结论HpVacA基因毒性片段表达成功,获得高纯度重组蛋白并具有良好的免疫反应性与免疫原性,为研制疫苗和制备诊断VacA(+)株感染试剂盒提供了可靠材料。