〔摘　要〕 目的 通过优化技术流程，探究人皮肤表皮干细胞(EPSCs)体外分离培养及表皮干细胞外泌体(EPSCs-Exo)分离纯化的方法。方法 首先通过优化人源EPSCs的分离酶，运用改良的无血清培养液，添加10种因子刺激EPSCs生长，促进其分泌EPSCs-Exo,同时维持EPSCs干性和增殖性，延缓EPSCs的分化和成熟。进一步优化差速离心的条件，高效高纯度提取人源的EPSCs-Exo。对人皮肤组织进行免疫荧光染色溯源EPSCs;对分离的EPSCs进行Western blot和免疫荧光染色检测其表面多个标志物；对EPSCs-Exo从形态、粒径大小、多个胞内和膜上标志物进行鉴定。结果 人皮肤组织分层表达表皮细胞的标志物，EPSCs高表达整合素α6(integrin-α6)、整合素β1(integrin-β1)、P63蛋白(P63)、细胞角蛋白19(CK19)等标志物，EPSCs上清液超速离心后的透射电镜显示茶托状结构，粒径大小检测直径介于30～150 nm，蛋白印迹显示Tsg101、CD9、CD63(溶酶体相关膜蛋白3)呈阳性，Calnexin、GAPDH呈阴性。结论 该研究成功在体外分离培养了人源EPSCs并获得人源EPSCs-Exo。