安徽医科大学学报
2003 06 432-434
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基金项目: 中国科学院生物科学与生物技术研究特别支持费课题 (编号 :STZ 0 0 0 3 )
作者:周文明,赵建龙,曹慧敏,张学军
关键词:寡核苷酸;;杂交;;生物标记
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2003.06.007
〔摘 要〕 目的 观察标记引物法、随机渗入标记法、末端转移标记法三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响。方法 将淋球菌 gyrA基因 91位密码子突变型探针倍比稀释成终浓度为 10 0 0 μmol/L~ 0 2 5 μmol/L的梯度浓度点样并制作寡核苷酸芯片 ,PCR扩增荧光标记包含gyrA基因突变的目的DNA片段 ,与芯片杂交 ,分别记录三种标记方法的杂交信号强度。结果 标记引物法的荧光信号最强 ,随机渗入标记法的荧光信号强度次之 ,其Cy5 dUTP最佳浓度为0 1mmol/L(dTTP :Cy5 dUTP =10∶1) ,末端转移标记法反应时间在 6 0min和 12 0min时荧光信号值相近。点样的探针浓度达到 31μmol/L以上 ,荧光信号为平台期。 结论 明确了三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响 ,有助于选择寡核苷酸芯片的荧光标记方法