安徽医科大学学报
2002 02 89-92
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基金项目: 国家 8 6 3生物领域基金资助项目 (编号 :2 0 0 1AA2 15 2 5 1)
作者：祖东,徐春晓,张智清,谭锦泉
关键词：受体,肿瘤坏死因子;;嵌合体蛋白质类;;克隆,分子
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2002.02.003
〔摘 要〕 目的 构建TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白的高效原核表达载体。方法 以人心肌cDNA文库为模板 ,PCR扩增TNF受体 (P5 5 )胞外区全基因 (sTNFR ED) ,亚克隆入pGEM T/IgGFc中构建 pGEM T/sTNFR ED∶Ig GFc重组子 ,然后以其为模板 ,在上游引物中引入原核细胞高频密码子 ,再次PCR扩增去信号肽TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合基因 (TNFR ED∶IgGFc) ,亚克隆入 pUC19载体 ,经序列测定正确后克隆入原核表达载体 pBV2 2 0中。结果 成功构建了TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白高效原核表达载体 ,命名为 pBV2 2 0 /TNFR ED∶IgGFc。结论 pBV2 2 0 /TNFR ED∶IgGFc表达载体的构建 ,为进一步表达TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白及其在中和TNF毒副作用、治疗自身免疫性疾病中的作用机制研究奠定了基础