基金项目: 安徽省科技厅科研基金 (编号 :0 0 2 2 0 31);; 安徽省教育厅科研基金资助 (编号 :99ji0 1112 )
作者:童畅,汪学龙,沈际佳
关键词:聚合酶链反应;;基因文库/血吸虫,日本
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2002.01.002
〔摘 要〕 目的 用PCR法自日本血吸虫童虫cDNA文库筛选磷酸丙糖转移酶 (TPM )基因 ,为进一步亚克隆和表达奠定基础。方法 根据GeneBank中的日本血吸虫TPM基因开放阅读框设计合成一对引物 ,应用PCR测定cDNA文库中该基因的频率。根据测得的频率 ,将适量的噬菌体接种于96孔细胞培养板上进行细菌培养扩增。再利用PCR鉴定阳性克隆所在位置 ,经过选择性扩增 ,筛选出阳性克隆 ,并环化成质粒 ,经测序验证后构建pGEM T/TPM克隆载体。结果 经过 3轮筛选 ,所得阳性克隆经过测序 ,用GenebankBLAST进行序列比较 ,证实为日本血吸虫磷酸丙糖转移酶基因。重组质粒 pGEM T经双酶切证实有约 76 0bp的插入片段。结论 从日本血吸虫cDNA文库中筛选出TPM基因 ,并成功地构建该基因的克隆载体 ,为研究该基因在血吸虫糖代谢中的作用创造了条件