安徽医科大学学报
2001 05 341-344
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基金项目: 广东省自然科学基金资助课题(编号:980117);; 卫生部基金资助课题(编号:98-1-091)
作者:王佑民,程桦,傅祖植
关键词:肌,骨骼;;葡萄糖/代谢;;转染;;受体
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2001.05.004
〔摘 要〕 目的 研究原代骨骼肌细胞中瘦素受体长胞内段mRNA表达增加对葡萄糖氧化的影响。方法 RT-PCR扩增瘦素受体长胞内段cDNA,将扩增产物插入真核表达质粒,构建重组体。重组表达质粒经脂质体介导转染原代骨骼肌细胞,转染后48 h加瘦素和D-[U-14C]葡萄糖,收集14CO2,液体闪烁检测其放射性。另经RT-PCR半定量方法检测瘦素受体长胞内段mRNA在骨骼肌细胞的表达。结果 扩增的瘦素受体长胞内段cDNA及其重组体在限制性内切酶酶切后所得各片段大小均与理论值一致。在重组表达质粒转染组、空表达质粒转染组和非转染组,前者特异性条带和β-actin条带积分光密度比值较后两者升高(均P<0.05);但3组细胞间葡萄糖氧化差异无显著性。结论 成功构建含有瘦素受体长胞内段cDNA的重组真核表达质粒。单纯增加瘦素受体长胞内段mRNA表达不能改善瘦素对骨骼肌细胞的葡萄糖氧化作用。