〔摘　要〕 目的　构建人 p16基因第二外显子cDNA克隆 ,制备其cDNA探针 ,建立 p16基因第二外显子PCR SouthernBlot分析方法。研究原发性肝细胞癌 (HCC) p16基因第一、二外显子、p15基因第二外显子纯合性缺失 ,p53基因第七外显子纯合性缺失、点突变以及HBV前C区、S区、X区在HCC中整合情况。方法　用RT PCR获得p16基因第二外显子cDNA ,将其插入质粒 pGEM T中 ,构建为重组质粒pGEM pl6。经蓝白选择、限制性内切酶酶切图谱分析、DNA序列分析筛选获得重组质粒的阳性克隆 ,插入片段经限制性内切酶酶切、纯化后 ,用随机引物法标记地高辛 ,以此为探针 ,用SouthernBlot方法分析p16第二外显子PCR产物。应用PCR、PCR SSCP和PCR RFLP等方法 ,对临床 38例HCC手术后标本中的p16基因第一、二外显子、p15基因第二外显子、p53基因第七外显子纯合性缺失和点突变进行分析。应用PCR和 3’末端碱基特异性PCR分析肝细胞癌基因组HBV前C区野生型和突变型、PCR分析S区和X区整合的情况。同时检测了血清中HBV前C区的阳性率。结果　重组质粒的限制性内切酶酶切图谱分析表明其酶切位点与原设计相符 ,插入片段大小为 30 7bp ,与引物区间大小一致 ;地高辛标记探针可与 p16PCR产物杂交。发现在这 38例HCC患者中 ,p16基因第二外显子的缺失率为 34 2 %