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重组葡激酶及其在大肠杆菌中高效表达与纯化

安徽医科大学学报 2001 01 18-21     字体:

基金项目:

作者:智强,周青,任斌,朱年春,赵丽萍

关键词:聚合酶链反应;;葡糖激酶/分离和提纯;;大肠杆菌

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2001.01.007

〔摘 要〕 目的 研究高效表达葡激酶载体的构建及其体外表达与产物的纯化。方法 用PCR方法扩增葡激酶cDNA ,插入质粒pET 2 2b中构建成表达载体 ,转化入大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,表达产物用Q Poros和S Sepharose纯化。 结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为葡激酶重组质粒 ,体外表达产物经离子交换纯化后HPLC纯度达 98%以上 ,SDS PAGE和WesternBlot实验证实该产物为葡激酶。结论 成功构建了重组葡激酶表达载体 ,并经表达纯化获得高纯度葡激酶 ,为产业化和临床应用奠定了良好基础。