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微小RNA-22-3p基因敲除小鼠的构建、繁育和基因鉴定

安徽医科大学学报     字体:

基金项目: 安徽省高校杰出青年科研项目(编号:2022AH020052);

作者:王安琪;张慧茹;周园园;刘崇;陈义昭;涂佳杰

关键词:miR-22;CRISPR/Cas 9;基因敲除;聚合酶链式反应;琼脂糖凝胶电泳;基因型鉴定;NLRP3;

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2025.06.011

〔摘 要〕 目的 采用CRISPR/Cas 9技术构建微小RNA-22-3p(miR-22)基因敲除(miR-22-/-)小鼠,繁育miR-22-/-小鼠并鉴定其基因型。方法 使用CRISPR/Cas9技术,构建miR-22-/-基因工程小鼠,基因鉴定F0代miR-22-/-小鼠后,待其性成熟后与同窝野生型小鼠交配得F1代miR-22-/-小鼠,通过实时荧光定量聚合酶联反应(qPCR)从RNA水平上分析miR-22敲除效率。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-22与靶基因的相互作用。结果 利用CRISPR/Cas 9技术成功构建了miR-22-/-小鼠,对繁育获得的小鼠进行了基因鉴定,鉴定出了miR-22+/+、miR-22+/-、miR-22-/-三种稳定的基因型。qPCR检测结果证实miR-22-/-小鼠与同窝野生型小鼠比较,心、肝、肺、肾、脾、胸腺六种组织中几乎不表达miR-22。Western blot检测出miR-22-小鼠组织中的NLRP3蛋白的相对表达量低于野生型小鼠。结论 成功构建了miR-22-/-小鼠模型,并得到稳定遗传的纯合miR-22-/-小鼠。miR-22对下游靶基因NLRP3有抑制作用。