〔摘　要〕 目的 瞬时转染重组人凝血因子X（rhFX）到HEK293细胞，优化转染条件，体外构建高效表达rhFX的方法，检测rhFX活性。方法 pcDNA3.1-EGFP与FX基因构建真核表达载体pcDNA3.1-EGFP-FX并转染HEK293细胞，验证转染系统的有效性。pcDNA3.1与FX基因片段构建重组表达载体pcDNA3.1-FX，脂质体方法转染HEK293细胞，Western blot和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测细胞上清液中rhFX的表达。优化转染条件，ELISA测定rhFX的浓度；凝血酶原时间（PT）和发色底物法测定rhFX凝血生物活性。结果 在HEK293细胞上清液中成功表达rhFX。在细胞密度80%，质粒DNA与：转染试剂的比例为1:2，转染后第3天，rhFX表达量最高。ELISA检测3次上清液表达量最高为5.20 ng/mL。与对照组pcDNA3.1空载体转染收集的上清液相比，实验组rhFX的PT时间更短（P < 0.000 1），基于rhFX的发色底物法测得依度沙班的半数抑制浓度(IC₅₀)为1.449 nmol/L文献报导的0.78 nmol/L处于同一数量级。结论 使用HEK293细胞成功表达出具有生物活性的rhFX蛋白，为进一步推动rhFX药物的研发奠定基础。