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耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌荚膜特异性解聚酶克隆表达及其相关功能研究

安徽医科大学学报     字体:

基金项目: 安徽省自然科学基金(编号:2408085MH233);感染性疾病安徽省重点实验室资助课题(编号:AHIDL-2412R); 安徽医科大学校基金资助项目(编号:2022xkj172);

作者:闫涛;汪娜;王秋妍;马成成;滕宣;余可雪;葛宏华;刘周

关键词:解聚酶;噬菌体;耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌;荚膜;生物膜;重组蛋白;

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2025.07.013

〔摘 要〕 目的 构建K64型荚膜特异性解聚酶重组蛋白Dep44,探讨其在对抗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染中的应用效力。方法 分离表达解聚酶的噬菌体(vBKpnHF1013,GenBank:PP803128),分析其基因序列,筛选具有解聚酶活性的候选蛋白,构建重组蛋白Dep44并验证其解聚酶活性。通过滴板法验证Dep44重组蛋白的敏感谱,通过生物膜清除及血清杀菌实验评估Dep44抗菌活性。结果 噬菌体vBKpnHF1013尾刺蛋白具有解聚酶活性,能特异性裂解K64型CRKP荚膜。生物膜清除实验结果显示:与对照组比较,2μg/mL与10μg/mL剂量的Dep44重组蛋白均可有效破坏细菌生物膜。血清杀菌实验结果显示:Dep44重组蛋白具有协同血清杀菌能力,但这种作用需要依赖补体系统的存在,Dep44本身不具备直接杀菌活性。结论 Dep44重组蛋白能够特异性裂解K64型CRKP荚膜,具备破坏生物膜及协同血清杀菌能力,有望应用于K64型CRKP相关感染的控制及医疗器械表面生物膜的清除。