基金项目: 江苏省高等学校自然科学研究重大项目(编号:18KJA320014)
作者:李华玲;杨迪;韦俊杰;陈章悦;陈菊萍;
关键词:环状RNA;;衰老;;泛素连接酶4环状RNA (circHERC4 hsa_circ_0007113);;人胚肺成纤维细胞(IMR-90)
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.07.016
〔摘 要〕 目的 研究泛素连接酶E3的环状RNA (circHERC4/hsa_circ_0007113)与人胚肺成纤维细胞(IMR-90)的衰老的关系。方法从circBase数据库上获得环状RNA circHERC4的全基因序列,将其克隆到环状RNA表达载体pLC5-ciR中,体外构建重组体pLC5-ciR (+)hsa_circ_0007113,经PCR、酶切、测序等对重组质粒进行鉴定。利用脂质体2000转染试剂将重组质粒转染到HEK293T和IMR90细胞中,并利用RT-PCR检测正常细胞组、空载体组及重组载体组中环状RNA circHERC4的表达情况;SA-β-gal染色检测各组细胞衰老情况;CCK-8法检测各组细胞增殖情况。结果测序正确,成功构建了环状RNA circHERC4的过表达载体,circHERC4可在HEK293T细胞中高效表达。与对照组相比,重组载体组的SA-β-gal染色阳性率降低(P<0.05),细胞增殖率升高(P<0.05)。过表达circHERC4后能提高IMR90细胞的增殖,抑制细胞的衰老。结论circHERC4具有潜在的抗衰老作用,为深入研究circHERC4的功能奠定了基础。