基金项目: 国家自然基金资助项目(编号:82074495);
作者:夷成龙;陶霓霞;杨灿;赵怡;项敏泓
关键词:结膜松弛症;Piezo1;Yoda1;MMP-9;机械损伤;球结膜成纤维细胞;
DOI:专辑:医药卫生科技
〔摘 要〕 目的 旨在观察球结膜成纤维细胞中Piezo1的表达是否参与结膜松弛症(CCH)的发生发展。方法 采用组织块贴壁法获得CCH患者和正常对照组(NC)的原代球结膜成纤维细胞,纯化后行成纤维细胞鉴定。免疫组化检测NC组和CCH组中Piezo1的表达情况。免疫荧光检测CCH组和NC组球结膜成纤维细胞中Piezo1的表达情况,以及Piezo1激动剂Yoda1干预后MMP-9的表达情况。qRT-PCR检测CCH组和NC组中Piezo1与MMP-9的mRNA表达情况,以及Yoda1干预后MMP-9的mRNA表达情况。此外,Yoda1干预后采用共聚焦显微镜检测NC组球结膜成纤维细胞中Ca2?内流情况;Yoda1干预后膜片钳检测NC球结膜成纤维细胞的电流幅度,验证Piezo1功能性表达。结果 成功培养原代球结膜成纤维细胞。免疫组化发现CCH组中Piezo1蛋白表达升高(P<0.01);qRT-PCR检测发现在CCH组中Piezo1的mRNA表达升高(P<0.01),MMP-9的mRNA表达升高(P<0.01),CCH+Yoda1组MMP-9的mRNA表达升高(P<0.01)。免疫荧光检测Piezo1发现CCH组相对于NC组荧光增强(P<0.05),加入Yoda1刺激后MMP-9的荧光较CCH组增强(P<0.05)。NC组球结膜成纤维细胞加入Yoda1后,共聚焦显微镜显示Piezo1的荧光增强(P<0.05);膜片钳检测NC组球结膜成纤维细胞加入Yoda1后激活的电流幅度增强(P<0.0001)。结论CCH中结膜组织产生的机械损伤上调了Piezo1的表达,而Piezo1的激活可能放大了CCH造成的机械性损伤。