基金项目: 国家自然科学基金面上项目(编号:82373877);
作者:葛锐麟;张慧茹;薛梓萌;涂佳杰
关键词:Spi1;条件性敲除;B细胞;CRISPR/Cas9技术;Cre/LoxP系统;PCR;流式细胞术;
DOI:专辑:医药卫生科技
〔摘 要〕 目的 构建B细胞条件性敲除Spi1基因小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点研究提供动物模型基础。方法 将Mb1-cre转基因小鼠与Spi1flox/flox小鼠进行杂交繁育,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出基因型Mb1-cre×Spi1flox/flox的小鼠即为B细胞条件性敲除Spi1基因的纯合子小鼠。结果 PCR法鉴定结果显示,采用flox引物鉴定时仅扩增出220bp条带,即基因型为Spi1flox/flox小鼠,采用Mb1-Cre引物鉴定时扩增出383bp条带,即基因型为Mb1-cre×Spi1flox/flox小鼠;流式细胞术结果显示,与Spi1flox/flox小鼠相比,Mb1-cre×Spi1flox/flox小鼠骨髓来源单个核细胞、外周血单个核细胞和脾脏来源的B细胞中PU.1表达水平显著降低,且PU.1在其他免疫细胞内(如CD4+T和巨噬细胞)正常表达。结论 该研究借助Cre/LoxP系统以及CRISPR/Cas9技术,成功构建出B细胞条件性敲除Spi1基因的小鼠,为深入探究PU.1在B细胞相关疾病里的具体作用提供了可靠的动物模型。