基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号：82370632);;安徽省高校杰出青年科研项目(编号：2023AH020033);;安徽省转化医学研究院科研基金项目(编号：2022zhyx-C07);;安徽医科大学科研水平提升计划(编号：2021xkjT016);;安徽医科大学第三附属医院基础与临床合作研究提升计划培育专项(编号：2022sfy014)
作者：许雅萍;王语涵;陈婷婷;李南;高萍萍;李玲;王华;孙妩弋;
关键词：肝细胞;;Sirt3;;基因敲除;;Sirt3~(Δhep)小鼠;;Cre-loxP;;基因型鉴定
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.03.003
〔摘 要〕 目的 运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3~(Δhep))小鼠，为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法 将loxP标记的Sirt3~(flox/flox)小鼠与Alb-Cre纯合子(Alb-Cre~(+/+))小鼠进行交配，F1代Sirt3~(flox/-)/Alb-Cre~(+/-)小鼠再与Sirt3~(flox/flox)小鼠进行交配并鉴定，F2代基因型为Sirt3~(flox/flox)/Alb-Cre~(+/-)的小鼠即为本实验所构建的Sirt3~(Δhep)小鼠，Sirt3~(flox/flox)/Alb-Cre~(-/-)小鼠即为对照小鼠Sirt3~(flox/flox)小鼠。提取鼠尾DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型；免疫荧光双染观察Sirt3在小鼠肝细胞中的表达；提取Sirt3~(Δhep)小鼠原代肝细胞及心脏、脾脏、肾脏、肺组织蛋白，Western blot法验证Sirt3在小鼠肝细胞及其他组织中的表达水平；HE染色观察小鼠肝脏及心脏、脾脏、肺等组织结构。结果 成功鉴定出Sirt3~(Δhep)小鼠；免疫荧光及Western blot结果显示，小鼠肝细胞中Sirt3蛋白表达水平低于对照组小鼠(P0.05);HE染色结果显示Sirt3~(Δhep)小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺、肾脏的组织学特征与对照组小鼠相比无明显变化。结论 成功构建肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠，为进一步研究肝细胞Sirt3基因在相关疾病中的调控作用机制奠定了基础。