〔摘　要〕 目的构建髓系特异性Spi1基因敲除小鼠并分析其基因型，为疾病病理机制及药物靶点研究提供动物模型基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理和Cre/LoxP系统，设计并构建sgRNA和Donor载体，以第2号外显子(Exon 2)所在的转录本为敲除区域，在Exon 2两侧各放置同向Loxp元件；将Cas9蛋白、sgRNA和Donor载体混合显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，移植受精卵到假孕的C57BL/6J母鼠的子宫中，19～20 d后获得F0代。将阳性F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配，得到稳定的F1代Spi1flox/+小鼠。F1代Spi1flox/+小鼠雌雄自交得到Spi1flox/flox小鼠。Spi1flox/flox与Lyz2-Cre+小鼠交配得到Spi1flox/+/Lyz2-Cre+小鼠，再将其与Spi1flox/flox交配，得到的Spi1flox/flox/Lyz2-Cre+小鼠为髓系特异性Spi1基因敲除(KO)小鼠；Spi1flox/flox/Lyz2-Cre-小鼠作为野生型(WT)小鼠。提取WT和KO小鼠DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型；Western blot检测WT和KO小鼠免疫细胞中脾病灶形成病毒前病毒整合癌基因-1/富含嘌呤盒1(PU.1)表达。结果PCR鉴定结果显示，采用flox引物鉴定时仅扩增出220 bp条带的小鼠，即基因型为Spi1flox/flox纯合子，采用Lyz2-Cre引物鉴定时扩增出700 bp的小鼠，基因型为Lyz2-Cre+;Western blot结果显示，与WT组比较，KO组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)和腹腔原位巨噬细胞(PM)中的PU.1不表达(P<0.01);T细胞中KO小鼠PU.1表达水平与WT小鼠差异无统计学意义；PCR和Western blot结果均表明髓系特异性Spi1KO小鼠构建成功。结论成功构建和鉴定髓系特异性Spi1KO小鼠，为进一步揭示PU.1在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。